[摘要] 目的：探讨不同直径刺山柑细胞聚集体黄酮含量与其颗粒大小、生长状态的关系及可能机制。方法：根据细胞直径的不同，分拣出3种不同大小的刺山柑细胞聚集体，对它们进行了黄酮含量、相关酶活性及再培养曲线的测定。结果：不同的细胞聚集体在形态大小、黄酮含量、酶的活性、生长速度等方面均存在着差异，其中颗粒最小的细胞聚集体黄酮含量约为颗粒较大的细胞聚集体的2倍，并且其丙二醛含量、苯丙氨酸解氨酶及过氧化物酶的活性及再培养曲线均具有相同的变化趋势。结论：不同聚集体黄酮含量与其颗粒大小及生长状态有一定的关系，个体较小的与氧气、培养基养分接触充分，利于细胞生长与次生代谢物的积累有关。
　　[关键词] 刺山柑；悬浮培养；聚集体；黄酮；直径
　　[中图分类号] R961[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）07（c）-019-04
　　
　　The research for the physico-chemical property of Capparis Spinosa L. suspension cell aggregation
　　LIU Wei1, LI Mao-teng1*, ZHU Yu-mei2, GAN Lu1, YU Long-jiang1
　　(1.College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074,China; 2. Modern Education Center, Shandong Medical College, Linyi 276000,China)
　　[Abstract] Objective:To investigate the relations between flavone content and particle size, growth condition of different diameters of Capparis Spinosa L. cell aggregation and discuss the possible mechanism. Methods:According to the differences of cell diameter, we selected 3 different sizes of Capparis Spinosa L. cell aggregation and determined flavone content, correlated enzyme activities and recultivate curve. Results:The cell aggregations had differences in shape as well as size, flavone content, enzyme activities, growth speed and so forth. The flavone content of the smallest cell aggregation was approximately twice compared to the larger ones, and its malonaldehyde content, the phenylalanine ammonialyase and peroxide enzyme activities and recultivate curve presented the same change tendency.Conclusion:The flavone content has certain relations with particle size and growth condition of different cell aggregation. The small individual contacts fully with the oxygen and the nutrient of culture medium, which is benefit to cell growth and the secondary metabolite accumulation.
　　[Key words] Capparis Spinosa L.; Suspension culture; Aggregation; Flavone; Diameter
　　
　　细胞聚集体是液体悬浮培养的植物细胞特有存在方式[1，2]。在研究中，往往将细胞培养物当作均匀的细胞或细胞聚集体而忽略了不同细胞聚集体的异质性。由于无性变异、通气量、摇瓶转速、培养基组成及成分等多方面复杂的影响，细胞培养中的聚集体无论在物理性质、生长程度、次生代谢产物产量等方面都存在着一定的差异，这些差异可能是造成次生代谢物产量波动的原因[2－5]，如Xu等[1]发现圆球形、质地致密、表现出一定分化水平的自固定化东北红豆杉细胞中紫杉醇的合成能力较强。刺山柑为白花菜科山柑属植物，在我国主要分布于新疆、甘肃、西藏等地[6]。刺山柑含有挥发油、生物碱类、类黄酮类及萜类等物质，具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗高血压及治疗痛风和风湿等功效[7-9]，其中所含有的类黄酮类物质是其抗菌抗炎等药效的主要成分。由于刺山柑生长环境特殊、生长周期较长、野生资源不断遭到破坏，因此细胞培养成为最为重要的积累其有效次生代谢物的方法。目前，我们已经实现了刺山柑愈伤组织的诱导[10,11]。对已经诱导出的刺山柑愈伤组织细胞，发现其呈现出大小不同的聚集体形态。在本实验的研究中，把刺山柑细胞聚集体的直径作为一个指标，分拣出三种大小不同的细胞聚集体，以阐明刺山柑悬浮培养中的聚集体理化性质及黄酮含量与细胞大小的关系。
　　1 材料与方法
　　1.1 实验材料
　　刺山柑愈伤组织由叶诱导而来，其材料为华中科技大学实验田种植的刺山柑植株。
　　1.2 培养条件
　　采用MS培养基作为基本培养基，内含1 mg/L 2,4-D、1.5 mg/L 6-BA, 蔗糖30 g/L，pH 5.8~6.0。高温121℃下灭菌20 min。光照培养的培养条件：光照强度2 000 Lux；光周期14 h光/10 h暗；温度（25±1）℃。暗培养的培养条件：光照强度<50 Lux；温度（25±1）℃。
　　1.3 细胞聚集体的分拣
　　使用刻度尺进行测定，将颜色、状态相似且长势较好的刺山柑愈伤组织细胞按直径不同分拣为0~2、2.1~5、5.1~8 mm三种梯度，进行重培养及各指标的检测。
　　1.4 实验方法
　　1.4.1 黄酮含量的测定依照文献[12，13]的方法修改，取烘干的甘草细胞，磨成粉末后，过100目筛，取0.05 g细胞粉末至3 ml离心管中，加入75%乙醇 3 ml，超声处理1 h后，8 000转/min离心6 min。取上清夜1 ml，加3 ml 95%乙醇，8 000转/min离心6 min。取两管（1个实验管，1个对照管）各加上清夜1 ml，实验管中加1 ml甲醇，再加0.5 ml KOH，显色5 min后补足甲醇至5 ml；对照管直接加甲醇补足到5 ml。在410 nm下测其OD值。
　　

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